市场中保健食品的种类较多,而不同种类的保健食品功效也存在很大的差异,功效成分是判断保健食品质量的重要依据。现阶段我国以《保健食品管理办法》为依据对保健食品进行管理,任何企业在保健食品申报过程中,必须依据该《办法》说明保健食品的功能以及关键有效成分等。此外还应当详细解释保健食品中功效成分的具体表现以及相关指标等。从我国保健食品的管理现状来看,仍然存在很大的提升空间,且保健食品的数量和种类也在不断增加。基于此,要不断完善和创新关于保健食品功效成分的检测方式,确保市场中的保健食品符合要求。从现阶段审批的保健食品来看,国内生产的保健食品功效成分主要是多糖类、黄酮类以及皂苷类几种,现在逐步延伸到维生素类、脂肪酸类、蛋白类等。保健食品依据大类划分,其检测方式主要有光学分析法和色谱分析法两大类,本文主要通过上述两种方式,对保健食品中的功效成分进行测定。
粗多糖的苯酚一硫酸分光光度测定法
测定原理。多糖经乙醇沉淀分离后,去除其他可溶性糖及杂质的干扰,再与苯酚一硫酸作用成橙红色化合物,其呈色度与溶液中的糖的浓度成正比,在485nm波长下比色定量。
样品处理。由于不少保健品添加了淀粉、糊精,一定要做相应的处理,否则结果偏高。添加淀粉的样品需加a-淀粉酶及糖化酶(如葡萄糖苷酶)处理。添加糊精的样品需加糖化酶(如葡萄糖苷酶)处理。处理的原则是将这类非活性多糖的碳水化合物全部酶解成单糖或低聚糖,再用乙醇沉淀所需的活性多糖以达到分离的目的。
光学分析法
在保健食品功效成分检测过程中,光学分析法就是借助于保健食品中功效成分的光谱特征,对已知物进行定性和定量的分析方式。常见的光学分析法有紫外红外可见光光度法、核磁共振波谱法以及原子吸收分光光度法等等,在保健食品功效成分检测过程中,最为常见的是紫外—可见分光光度法以及红外分光光度法两种。
紫外-可见分光光度法。此种检测技术是利用保健食品功效成分在紫外(200~400nm)和可见光(400~760nm)区分子吸收光谱的分析检测方式。紫外-可见分光光度法是以保健食品功效成分对光的选择吸收性为特性展开的检测方式,以朗伯—比尔定律为检测依据,经常使用的紫外—可见分光光度计包括四种,现阶段常用的则是双光束分光光度计。相对于其他光度计,双光束分光光度计的优势较多,如检测设备成本较低、检测过程比较快捷便利、灵敏度较高。通过紫外-可见分光光度计检测技术,能够对保健食品功效成分中黄酮类、皂苷类以及萜类等成分进行测定,也能够进行保健食品中的复合甜味以及防腐剂的检测。
红外分光光度法。红外外光光度法以红外吸收光谱为依据,保健食品功效成分中的原子经过多种形式的振动形成红外吸收光谱,而不同形式的振动所产生的吸收峰也各不相同,不同基团振动的吸收峰值总是会出现在某一特定的区域。红外光有近红外光线和远红外光线两种,前者的穿透能力较强,而后者则具有加热能力。在保健食品功效成分检测过程中,使用近红外光谱优势较多:首先,检测过程比较方便,在检测前不需要前处理和化学反应过程,且检测速度非常快,能够缩短检测周期和时间;其次,操作比较简单,对检测人员的专业能力要求不高,单人即可完成检测,且能够同时检测多项指标内容,所以能够极大地提升检测效率;最后,检测成本较低,且在检测过程中不会产生污染物质。红外光谱检测样本的形式和种类较多,现阶段保健食品的形态除了液体和固体以外,还有粉末状、糊状、纤维状以及各类动物食品以及源性食品等等,这些均可以利用红外光谱检测,如保健食品中的酚类(IR吸收峰在1500~1600cm-1、3300cm-1)、黄酮类(I R吸收峰在1500~1700cm-1)、香豆素(I R吸收峰在1500~1600cm-1的芳环吸收峰,1700cm-1附近有不饱和内酯吸收峰)以及生物碱等。
色谱分析法
色谱分析法是保健食品功效成分常见检测技术之一,此种检测分析方法利用色谱技术,对功效成分进行分离和分析,最终得出检测结论。色谱分析法最早由俄国植物学家Mikhail提出,最初是使用碳酸钙分离植物中的色素。色谱分析法的分离原理是溶于流动相中的各组分经过固定相时,因为会与固定相产生亲和吸附,或者分配的强度不同,在固定相中停留的时间存在差异,并按照时间从固定相中流出。随着技术的进步,在该检测方式的基础上又形成了气相、液相以及薄层等色谱法,20世纪60年代出现了高效液相以及凝胶等色谱技术。在保健食品的功效成分检测过程中,主要使用气相色谱法以及高效液相色谱法两种。
气相色谱法。此种检测方法以气体的流动相建立的色谱为检测依据,常见的气相色谱法包括毛细管气相色谱法以及填充气相色谱等。气相色谱法具有选择性高、效果好、灵敏度高以及分析速度快的优势。气相色谱法在保健食品功效成分检测乃至整个食品检测领域都有着广泛的应用。在保健食品功效成分检测过程中,只要是检测成分能够以直接或者间接方式气化成为有机质,则均可以通过气相色谱法展开检测,如对保健食品中的脂肪酸、大蒜素等功效成分展开检测,此外也能够应用于保健食品中的农药残留以及溶剂残留检测。
高效液相色谱法。高效液相色谱法是液相色谱法的升级,在食品检测过程中广泛应用。与气相色谱法不同的是,液相色谱法是以高压下的液体流动为流动相的色谱过程,主要用于检测保健食品中沸点较高、分量比较大且热稳定性能较差的功效成分,尤其是在对保健食品中维生素、部分氨基酸、苷类等功效成分的检测过程中发挥着其他检测方式不可替代的作用。陈毓芳等使用高效液相色谱他检测方式不可替代的作用。陈毓芳等使用高效液相色谱法测定保健食品中的核黄素、VB6、烟酸、烟酰胺等11种功效成分,在测定过程中使用高效液相色谱法对10类样品共计30份检本进行检测,在检测样本中包括功能性饮料以及营养素咀嚼片等等,检测效果比较明显:在功能性饮料中检测出红景天苷(575mg/kg)、在营养素咀嚼片中检测出吡哆醇(355mg/kg)、褪黑素(155mg/kg)以及VB1(300mg/kg)。近年来一些新式的高效液相色谱检测仪器不断问世,且检测对象越来越具有针对性,如专门检测氨基酸或者糖类的设备仪器。此外,该技术在检测保健食品中非功能性物质,如添加剂以及污染物等也发挥了重要作用。